一、 液相色譜流動相的性質(zhì)、要求
① 流動相不得改變填料的任何性質(zhì)。 ②純度。色譜柱的壽命與流動相有較大的關(guān)系，特別是其所含雜質(zhì)在柱上有大量沉積的溶劑。③與檢測器匹配。 ④粘度要低。高粘度溶劑會影響溶質(zhì)的擴散、傳質(zhì)，降低柱效，還會使柱壓增加，分離時間延長。選擇沸點在100℃以下的流動相。
二、 液相色譜流動相的pH值
采用反相色譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱堿（7≤pKa≤8）樣品時，通過調(diào)節(jié)流動相的pH值，以抑制樣品組分的解 離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。對于弱酸，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值 時，弱酸主要以分子形式存在；對弱堿，情況相反。分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液；分析弱 堿樣品時，通常在流動相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。
三、流動相的選擇。
在化學(xué)鍵合相色譜法中，溶劑的洗脫能力直接與它的極性相關(guān)。在正相色譜中，溶劑的強度隨極性的增強而增加；通常采用烷烴加適量極性調(diào)整劑。 反相色譜的流動相通常以水作基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑，如甲醇、乙腈等。極性調(diào)整劑的性質(zhì)及其所占比例對溶質(zhì)的保留值和分離選擇性 有顯著影響。一般情況下，甲醇-水系統(tǒng)能滿足多數(shù)樣品的分離要求，且粘度小、價格低，是反相色譜zui常用的流動相。
四、流動相的濾過。
所有溶劑使用前都必須經(jīng)0.45μm濾膜濾過，以除去雜質(zhì)，色譜純試劑也不例外。 用濾膜過濾時，特別要注意分清有機相濾膜和水相濾膜。有機相濾膜一般用于過濾有機溶劑，過濾水溶液時流速低或濾不動。水相濾膜只能用于過濾水溶液，嚴(yán)禁用 于有機溶劑，否則濾膜會被溶解。溶有濾膜的溶劑不得用于HPLC。對于混合流動相，可在混合前分別濾過，如需混合后濾過，有機相濾膜。
五、流動相的脫氣。
所用流動相必須先脫氣，否則容易產(chǎn)生氣泡，影響泵的正常工作。
脫氣方法：
1.氦氣脫氣法
2.電磁脫氣法
3.超聲波脫氣法：超聲脫氣優(yōu)點：10-20分鐘已足夠；不影響溶劑組成。
注意：超聲時應(yīng)避免溶劑瓶與超聲槽底部或壁接觸，以免玻璃瓶破裂，容器內(nèi)液面不要高出水面太多。
六、流動相的制備。
用高純度的試劑配制流動相，必要時照紫外分光光度法進行溶劑檢查，應(yīng)符合要求，水應(yīng)為新鮮制備的高純水，利用超級純水器制得或用重蒸餾水。凡規(guī)定pH值的流動相應(yīng)使用精密pH計進行調(diào)節(jié)。應(yīng)配制足量的流動相備用。
七、流動相的貯存。
流動相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。因許多有機溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑，導(dǎo)致 溶劑受污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng)，可能造成柱效降低。貯存容器一定要蓋嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，也防止氧和二氧化碳溶入流動相。 磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用。
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