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液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，簡(jiǎn)稱(chēng)HPLC）又叫做高壓或高速液相色譜、高分離度液相色譜或近代柱色譜,以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，是色譜法的一個(gè)重要分支。液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上，引用了氣相色譜的理論，在技術(shù)上，流動(dòng)相改為高壓輸送(zui高輸送壓力可達(dá)4.9´107Pa);色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜(每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬(wàn)或幾十萬(wàn));同時(shí)柱后連有高靈敏度的檢測(cè)器，可對(duì)流出物進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)。

大豆黃卷為豆科植物大豆的種子發(fā)芽后曬干而成。對(duì)肺炎球菌、金黃色葡萄球菌等均有抑制作用?？共《咀饔茫河糜诓《拘愿忻啊⒘鞲?。具有清熱透表；除濕利氣的功效。

　　本品為豆科植物大豆Glycine max(L.)Merr.的成熟種子發(fā)芽干燥而得。大豆用水浸泡至膨脹，將水放出，用濕布覆蓋，每日用清水沖洗一次或噴淋二次，待芽長(zhǎng)至0.5cm～1cm時(shí)，取出，干燥。

　　「性狀」 本品略呈腎形，長(zhǎng)約8mm，寬約6mm。表面黃色或黃棕色，微皺縮，一側(cè)有明顯的臍點(diǎn)，一端有1彎曲胚根。外皮質(zhì)脆，多破裂或脫落。子葉2片，黃色。氣微，味淡，嚼之有豆腥味。以粒大、飽滿(mǎn)者為佳。

　　「鑒別」 (1)取本品粉末1g，加稀乙醇30ml，超聲處理30分鐘，離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)酉∫掖?ml使溶解，取上清液， 作為供試品溶液。另取亮氨酸對(duì)照品，加稀乙醇制成每1ml 含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(19：5：5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以茚三酮試液， 在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

　　(2)取本品粉末2g，加80%乙醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?0%乙醇1ml使溶解，取上清液，作為供試品溶液。另取染 料木苷對(duì)照品，加80%乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～10μl、對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(10：1.7：1.3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)缸 中預(yù)飽和30分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜 相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

　　「檢查」水分 不得過(guò)11.0%(附錄Ⅸ H)。

　　總灰分 不得過(guò)7.0％(附錄Ⅸ K)

　　「含量測(cè)定」 照液相色譜法測(cè)定。

　　色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇為流動(dòng)相A，以1%醋酸溶液為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行梯度洗脫；柱溫35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm。理論板數(shù)按大豆苷、染料木苷峰計(jì)算均不得低于5000。

　　時(shí)間(分鐘) A(%) B(%)

　　0～25

　　25～33 28

　　28→45 72

　　72→55對(duì)照品溶液的制備 取大豆苷、染料木苷對(duì)照品各約10mg，精密稱(chēng)定，置50ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻；精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

　　供試品溶液的制備 取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)約1.0g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，稱(chēng)定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心(2000轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘，取上清液，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

　　測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

　　本品按干燥品計(jì)算，含大豆苷(C21H20O9)和染料木苷(C21H20O10)的總量不得少于0.08%。

　　「炮制」 取燈心草、淡竹葉置鍋內(nèi)，加入適量水煎煮二次，*次60分鐘，第二次30分鐘，合并煎液，濾過(guò)。濾液與大豆黃卷共置鍋內(nèi)，煮至藥液被吸盡，取出，干燥。

　　每100kg凈藥材用燈心草1kg、淡竹葉2kg。

　　Syltech500型液相色譜儀(單泵配置/梯度)

　　1 泵 P501型恒流高壓輸液泵

　　1.1 液體輸送原理：雙柱塞串聯(lián)往復(fù)方式，自動(dòng)脈沖抑制系統(tǒng)，另配有溶劑壓縮因子程序，能自動(dòng)補(bǔ)償流量，液體輸送更

　　1.2 zui大輸送壓力：大于等于6000PSI(約42MPa以上)

　　1.3 流速精度：0.1%

　　1.4 流速范圍：(0.001-10.000)mL/minzui小增量0.001mL/min

　　1.5 柱塞桿清洗：不需另配設(shè)備即可自動(dòng)柱塞桿清洗，保護(hù)柱塞桿

　　1.6 安全性：配有開(kāi)機(jī)自檢，高低壓報(bào)警和保護(hù)功能

　　1.7 梯度系統(tǒng)：二元梯度混合系統(tǒng)/單泵系統(tǒng)
       

　　2 紫外檢測(cè)器UV501型紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器
     

　　3 色譜柱：VertexTMXB-C18 4.6*250mm*5um 液相色譜柱、配保護(hù)柱

　　4 柱溫箱：室溫上10度到100度(0.1度增量)

　　5 N2010藥典版色譜工作站：色譜工作站(滿(mǎn)足2010版藥典要求，美國(guó)制作)中英文操作軟件，支持WIN9X/XP/2000/2003等操作系統(tǒng)，硬件嵌入檢測(cè)器，數(shù)字信號(hào)直接采集處理

　　6 Vertex7825i手動(dòng)進(jìn)樣閥：Vertex7825i手動(dòng)進(jìn)樣閥(帶遠(yuǎn)程觸發(fā)開(kāi)關(guān))，自帶20UL定量，耐壓8000psi，進(jìn)樣次數(shù)超1萬(wàn)次以上